体内转染常见问题

1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？

①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。

②转染试剂和动物。

③进行注射的器材。

2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？

可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要求核酸高纯度。因为纯度直接影响转染效果，在同样剂量的情况下，高纯、高质量的核酸可比普通纯度的转染效果高几倍，而且不容易造成动物炎症反应和死亡。如果用通常质量的核酸用于体内转染，建议在保持转染试剂和核酸比例情况下，同步加大用量。

3.转染试剂和核酸需要使用多少？

转染RNA和DNA的剂量有差别，一般来说，RNA尾静脉注射成年小鼠，每只每次，需要100ug核酸和50ul转染试剂。局部注射的剂量会小很多，大约总注射量的1/8为转染试剂。

4.采用哪种注射途径比较好？

根据课题研究的不同，可以采用尾静脉注射，局部注射等方式。

5.注射后，试剂是如何在体内分布的，有特异性吗？

采用尾静脉注射，通过血液循环系统分布，没有特异性；通过局部注射，一般分布在局部。

6.试剂作用原理是什么？对动物有什么影响？

Entranster^TM体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。

7.转染效果如何检测？

一般根据课题研究要求进行，如果单纯检测转染效率，推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究，采用组织学和生理学，以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性，通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法，由于体内取出的组织材料背景高，检测较为困难。

Entranster^TM什么时候推出来的？转染效果怎样？有哪些实验室应用？

Entranster^TM是2010年由英格恩公司研发推出的，虽然推出时间不长，但已有很多实验室应用，并陆续有很多高质量文献发表。转染效果非常好，尤其对小片断核酸(如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor)的转染效果很好。目前应用的实验室，有美国、欧洲以及韩国、中国等许多国家的一流实验室。